氨基酸分析仪

更新时间:2023-02-20 09:55

氨基酸分析仪,是指用于测定蛋白质、肽及其他药物制剂氨基酸组成或含量的方法。进行氨基酸分析前,必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸。它是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱仪。氨基酸分析仪由色谱柱自动进样器检测器数据记录和处理系统组成。氨基酸分析仪的基本原理为流动相缓冲溶液)推动氨基酸混合物流经装有阳离子交换树脂的色谱柱,各氨基酸与树脂中的交换基团进行离子交换,当用不同的pH缓冲溶液进行洗脱时因交换能力的不同而将氨基酸混合物分离,分离出的单个氨基酸组分与茚三酮试剂反应,生成紫色化合物或黄色化合物,用可见光检测器检测其在570 nm、440 nm的吸光度。这些有色产物对应的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸浓度之间的关系符合朗伯-比尔定律。据此,可对氨基酸各组分进行定性、定量分析。氨基酸分析仪也可利用阴离子交换分离后经积分脉冲安培法检测,该检测方法无需将待测氨基酸进行柱前或柱后衍生。

简介

仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)

系统

通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。

效果

分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:<0.5 pmol;氨基酸分析仪:<10 pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。

辨别

1、原理。基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法(IEC)。此类方法由Stein和Moore两人1958年发明,并于1972年获诺贝尔奖,是当今国际标准国家标准以及仲裁和涉外的方法。

2、重要指标。满足分析需要的技术指标分离度重复性等要求,而其中的分离度又是更为重要的指标,因为,色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提,只有峰分开了,才有意义去讨论定性和定量的重复性。

3、指标的真实性。有些厂家只标出个别氨基酸的指标如Asp或Arg,或只用平均数据替代全部数据等等,而仪器性能好,经营信誉较高的厂家就会标出全部氨基酸的指标供用户参考。

4、仪器的可靠性。如果仪器今天堵了、明天漏了,用户不仅要付出大量人力财力,分析结果可信度也将大打折扣。

5、仪器的运行成本。例如是否可以使用国产试剂、柱子寿命(以多少次进样计算、而不以多少年计算)等。

6、仪器设计是否有利于氨基酸分析。例如是否有惰性气体保护(茚三酮极易被氧化)、是否提供在线脱气、是否提供溶液和样品的制冷控制等。

7、售后服务。分析过程中遇到困难是在所难免,厂家必须能够快速响应、尽快解决问题。另外,常用备件的价格也是一个重要因素,因为用户在购买前一般难以注意到售后的问题,而很多厂家也没有公示自己的常用备件价格,这就为将来的使用埋下了隐患,事实上,也的确有很多仪器在出现一些看似微小的故障之后,就因为维修费用太高而被“束之高阁”。

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