更新时间：2023-12-14 12:07
生物学,细胞生物学以其实验条件便于控制,实验稳定,重复性好,实验周期短,仪器试剂(包括各类试剂盒)发展快,手段丰富,国际研究普遍(使新方法,新技术层出不穷),研究积累快,参考文献丰富,可以观察人体的不同组织的细胞,分子(这又强于动物实验),给应用该方法技术研究创造了绝佳的条件已进行的研究揭示和开拓出生命科学广大的未知领域. 由于分子生物学新兴,发展快,给国内外,中西医创造了同等的发展和应用的机会,再次使中,西医有可能站到同一起跑线上.抓住这个千载难逢的机会,充分利用它,驾御它,必将给中医学注入强大的生命.
几千年来,中医在运用天然药物方面积累了丰富的经验.比如其中一些天然动植物药物的粗制品,比如水蛭素,蛇毒抗栓酶类粗制品已经作为我国的传统医药产业.但是当国外采用了分子生物学技术和生物工程,生产出水蛭素,类凝血酶素,既降低了成本,又提高了质量的稳定性.反销我国和国际市场,对我国传统医药产业形成了巨大竞争.有识之士开始呼吁不能坐视祖国医学优秀遗产的优势失去,主张抓紧采用分子生物学研究天然中药的有效成分,开发新药,不然势将失去优势.通过几十年的研究,中药所面临的问题已经暴露得十分清楚,比如中药材的质量稳定,占用耕地,有效成分和若干有效成分最佳组合的探索,有效成分得率需要提高,以及服用的安全,方便等均有赖于大量的中药学基础研究,而已有的研究表明,分子生物学是十分重要,有效的研究手段. 中药的研究有赖于中医基础的研究,而不加强分子生物学技术对中医基础的研究,没有强大的基础研究的积累和支撑,药物的研究,开发将成为无本之木.
中医药的作用发挥,脏腑病机的变化,不同治法(具体落实到中药复方及其有效成分,针灸,推拿等治疗方法)的作用环节和最终作用的发挥,均落实到人体基因转录与表达的调控.已有的研究表明,中医药的取效,往往是通过对基因的转录与表达调控实现的.甚至,一些基因缺失或突变所引起的疾病,中医药通过对其它有关基因的转录调控,进行补偿,达到治疗疾病的目的.深入研究对于阐明中医药的作用机制,阐明生命的调控原理,均具有重要的科学意义.作为对中医学优秀遗产的继承和发展,这部分的研究具有广阔的天地,是中医基础理论研究的重头.
二.分子生物学的主要技术和方法
(一)载体
载体的使用目的:
(1)重组基因,以便放大某一基因片段,用于探针,基因功能检测,报道基因研究等.方法是:把某一DNA片段插入到相应的载体(比如质粒,噬菌体,哺乳类细胞表达载体等),给予扩增,用以标记探针,测序,cDNA库建立,基因功能检测等多种分子生物学实验.因此重组质粒就成为中医药实验研究中最为常规的实验.
通常,扩增目的DNA主要借助两类方法,即PCR技术和载体重组技术,鉴于PCR技术受到酶的性能和方法学等多方面的限制,某些DNA和超过一定长度DNA的扩增会有困难,所以载体重组技术倍受青睐.
(2)DDPCR产物的克隆和测序.
(3)RACEPCR产物的克隆和测序.
(4)构建基因库,cDNA库,等.
(5)基因功能检测.
(6)基因工程(包括基因治疗之类).
1.质粒.质粒是一类双链,闭环的DNA分子,长度为3kb左右,存在于细菌体中,独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位.通过改造,使实验室常用质粒具备了以下几种特性:(1)含有多克隆位点区域,可方便的插入目的DNA片段.(2)对细菌的可转移性,即在实验中,可将质粒诱导入细菌.(3)选择标记.常用的有抗生素抗性基因.
这样,一旦质粒进入细菌,便可使该细菌对相应的抗生素产生抵抗能力,在含这一抗生素的琼脂平板上传代,如此,便于鉴定质粒诱导入细菌成功与否.(4)在细菌体内可获得较高的拷贝数,例如一种叫pUC的质粒,在单一细菌体中的拷贝数可达500-700个.因此质粒已成为分子生物学中应用最为广泛的载体.